องค์ประกอบทางเคมีของสเตนเลสสตีล 347 ขนาดของเลือดดำหรือเส้นเลือดฝอย เฉพาะสำหรับการตอบสนองของ SARS-CoV-2 และทีเซลล์จะกำหนดภูมิคุ้มกันต่อโควิด-19

ขอขอบคุณที่เยี่ยมชม Nature.comคุณกำลังใช้เวอร์ชันเบราว์เซอร์ที่มีการรองรับ CSS แบบจำกัดเพื่อประสบการณ์ที่ดีที่สุด เราขอแนะนำให้คุณใช้เบราว์เซอร์ที่อัปเดต (หรือปิดใช้งานโหมดความเข้ากันได้ใน Internet Explorer)นอกจากนี้ เพื่อให้มั่นใจว่าได้รับการสนับสนุนอย่างต่อเนื่อง เราจะแสดงไซต์โดยไม่มีสไตล์และ JavaScript
แถบเลื่อนแสดงสามบทความต่อสไลด์ใช้ปุ่มย้อนกลับและปุ่มถัดไปเพื่อเลื่อนไปตามสไลด์ หรือใช้ปุ่มตัวควบคุมสไลด์ที่ส่วนท้ายเพื่อเลื่อนไปตามแต่ละสไลด์

องค์ประกอบทางเคมีของสแตนเลส 347

องค์ประกอบทางเคมีของท่อคอยล์สแตนเลส 347

องค์ประกอบทางเคมีและคุณสมบัติทางกลของท่อขดสแตนเลส 347 มีดังนี้:
- คาร์บอน – สูงสุด 0.030%
- โครเมียม – 17-19%
- นิกเกิล – 8-10.5%
- แมงกานีส – สูงสุด 1%

คุณสมบัติทางกลของท่อขดสแตนเลส 347

ตามที่ผู้ผลิตท่อคอยล์สแตนเลส 347 คุณสมบัติทางกลของท่อคอยล์ 347:
- ความต้านแรงดึง (psi) – 75,000 นาที
- ความแข็งแรงของผลผลิต (psi) – 30,000 นาที
- การยืดตัว (% ใน 2″) – ขั้นต่ำ 25%
- ความแข็งบริเนล (BHN) – สูงสุด 170

การใช้งานและการใช้ท่อคอยล์สแตนเลส 347

• ท่อขดสแตนเลส 347 ที่ใช้ในโรงงานน้ำตาล
• ท่อขดสแตนเลส 347 ที่ใช้ในปุ๋ย
• ท่อคอยล์สแตนเลส 347 ใช้ในอุตสาหกรรม
• ท่อคอยล์สแตนเลส 347 ที่ใช้ในโรงไฟฟ้า
• ท่อขดสแตนเลส 347 ใช้ในอาหารและผลิตภัณฑ์นม
• ท่อขดสแตนเลส 347 ที่ใช้ในโรงงานน้ำมันและก๊าซ
• ผู้ผลิตท่อคอยล์สแตนเลส 347 ใช้ในอุตสาหกรรมต่อเรือ

เชื่อกันว่าทีเซลล์ที่จำเพาะต่อ SARS-CoV-2 สามารถป้องกันการติดเชื้อและการลุกลามของโควิด-19 ได้ แต่ไม่มีหลักฐานโดยตรงสำหรับเรื่องนี้ในที่นี้ เราเปรียบเทียบการวัดเลือดครบของทีเซลล์บวกอินเตอร์เฟอรอน-γ เฉพาะเชื้อ SARS-CoV-2 กับผลการตรวจวินิจฉัยโรคโควิด-19 ที่เป็นบวก (PCR และ/หรือการไหลด้านข้าง) ภายใน 6 เดือนนับจากการเก็บเลือดของ Lianในบรรดาผู้เข้าร่วม 148 คนที่บริจาคตัวอย่างเลือดจากหลอดเลือดดำ ขนาดของการตอบสนองของทีเซลล์ที่จำเพาะต่อ SARS-CoV-2 นั้นสูงกว่าในกลุ่มที่ยังคงได้รับการปกป้องมากกว่าผู้ที่ติดเชื้ออย่างมีนัยสำคัญ (P < 0.0001)% ความเสี่ยงต่อการติดเชื้อ ในขณะที่ความรุนแรงสูงลดความเสี่ยงนี้ลงเหลือ 5.4%ผลลัพธ์เหล่านี้สรุปโดยผู้เข้าร่วมเพิ่มเติมอีก 299 รายที่ทดสอบการตรวจเลือดเส้นเลือดฝอยแบบปรับขนาดได้ ซึ่งเอื้อต่อการเข้าถึงข้อมูลภูมิคุ้มกันของทีเซลล์ในระดับประชากร (14.9% เทียบกับ 4.4%)ดังนั้นการวัดค่าทีเซลล์โดยเฉพาะสำหรับ SARS-CoV-2 จึงสามารถทำนายความเสี่ยงของการติดเชื้อได้ และควรได้รับการประเมินเมื่อติดตามสถานะภูมิคุ้มกันของบุคคลและประชากร
การวัดและการทำความเข้าใจการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันต่อการติดเชื้อ SARS-CoV-2 เป็นสิ่งสำคัญในการพัฒนากลยุทธ์ในอนาคตที่มีประสิทธิผล เพื่อลดผลกระทบด้านสาธารณสุขและเศรษฐกิจจากการระบาดของ COVID-19 ในอนาคตการระบุความสัมพันธ์ทางภูมิคุ้มกันจะให้ข้อมูลที่สำคัญเกี่ยวกับความอ่อนแอของประชากรต่อการติดเชื้อไวรัส ซึ่งอาจเป็นการเตือนล่วงหน้าถึงการเข้ารักษาในโรงพยาบาลถึงจุดสูงสุด และยังช่วยให้ผู้คนสามารถจัดการความเสี่ยงในการติดเชื้อและความเสี่ยงในการติดเชื้อผู้อื่นเป็นการส่วนตัวได้การเฝ้าระวังภูมิคุ้มกันได้รับการพิสูจน์แล้วว่ามีความสำคัญในการประเมินประสิทธิผลของวัคซีนป้องกันโควิด-19 ในผู้ป่วยที่มีสุขภาพแข็งแรงและมีความเสี่ยงสูง1,2,3 โดยเฉพาะอย่างยิ่งในสายพันธุ์กลายของ SARS-CoV-24 และการตรวจหาภาวะภูมิคุ้มกันบกพร่องจะหมายถึงความจำเป็นในการเพิ่มภูมิคุ้มกัน รับการฉีดวัคซีนและป้องกัน การระบาดในอนาคต
ระดับภูมิคุ้มกันของแต่ละบุคคลต่อการติดเชื้อ SARS-CoV-2 ขึ้นอยู่กับปัจจัยหลายประการ ได้แก่ ปริมาณไวรัส ณ เวลาที่สัมผัส ประเภทของไวรัส อายุ สถานะการฉีดวัคซีน/การติดเชื้อครั้งก่อน อาการป่วยร่วม ยารักษาโรค และที่สำคัญที่สุดคือ การติดเชื้อต้าน SARS-CoV .2 การตอบสนองของภูมิคุ้มกันแบบปรับตัวเกิดขึ้นในเวลาที่สัมผัสกับไวรัส5การประเมินการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันต่อการติดเชื้อ SARS-CoV-2 และ/หรือการฉีดวัคซีนมุ่งเน้นไปที่การตรวจทางเซรุ่มวิทยาที่วัดการมีอยู่ของแอนติบอดีจำเพาะสำหรับโปรตีนที่มีโครงสร้าง (เช่น สไปค์ไกลโคโปรตีน)อย่างไรก็ตาม การมีอยู่หรือไม่มีแอนติบอดีเพียงอย่างเดียวไม่สามารถระบุการตอบสนองของภูมิคุ้มกันในการป้องกันได้อย่างแม่นยำ เนื่องจากการตอบสนองจะลดลงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเวลาผ่านไป6 และการทำให้สายพันธุ์ SARS-CoV-2 เป็นกลางในการฟื้นตัวหรือการฉีดวัคซีนซ้ำซ้อน กิจกรรมที่อ่อนแอซึ่งอาจนำไปสู่ จำนวนผู้ติดเชื้อที่ลุกลาม7.แท้จริงแล้ว การป้องกันจากการแสดงอาการของเชื้อ COVID-19 ที่เกิดจากตัวแปร Omicron (B.1.1.529) ลดลงเหลือประมาณ 10% หลังจากการฉีดวัคซีน mRNA เพียง 4-6 เดือน แม้ว่าการป้องกันโรคร้ายแรงจะคงอยู่ >68% เป็นเวลาอย่างน้อย 7 เดือน8การวัดการตอบสนองของทีเซลล์หน่วยความจำแบบปรับตัว ซึ่งให้การป้องกันในระยะยาวต่อการติดเชื้อไวรัส เป็นตัวบ่งชี้ความไวต่อการติดเชื้อ SARS-CoV-2 ที่ดีที่สุด และดังนั้นจึงเป็นข้อบ่งชี้ที่ดีกว่าถึงความเสี่ยงในการทดสอบผลบวกสำหรับ COVID-199 เนื่องจาก T เฉพาะ เซลล์สามารถป้องกันการติดเชื้อได้โดยไม่มีการแปลงซีโร10,11อย่างไรก็ตาม การวัดการตอบสนองของทีเซลล์ได้รับความสนใจน้อยลง เนื่องจากปัญหาด้านระเบียบวิธีและปัญหาด้านลอจิสติกส์ในการรับและขนส่งตัวอย่างเลือดจากหลอดเลือดดำ โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อทำการศึกษาเชิงสังเกตขนาดใหญ่เพื่อประเมินประสิทธิภาพของวัคซีนและติดตามภูมิคุ้มกันอย่างไรก็ตาม ผู้ที่ได้รับการฉีดวัคซีนจะแสดงการทำงานของทีเซลล์ที่แข็งแกร่งต่อเชื้อ SARS-CoV-2 ซึ่งอาจชดเชยการสูญเสียปฏิกิริยาของแอนติบอดีเพื่อจำกัดความรุนแรงของโควิด-1912,13
ในที่นี้ เราพยายามที่จะทำความเข้าใจว่าการวัดการตอบสนองของทีเซลล์ SARS-CoV-2 เพียงครั้งเดียวสามารถทำนายความเสี่ยงที่แท้จริงของการติดเชื้อ SARS-CoV-2 ภายใน 6 เดือนนับจากการเก็บตัวอย่างเลือด โดยไม่คำนึงถึงปัจจัยที่มีอิทธิพลต่อระบบภูมิคุ้มกันก่อนหน้านี้หรือไม่เพื่อให้การทดสอบทีเซลล์มีปริมาณงานสูงและใช้ได้กับการศึกษาขนาดใหญ่ เรายังพยายามทำให้การทดสอบมีขนาดเล็กลงเพื่อให้สามารถดำเนินการได้โดยใช้ตัวอย่างเลือดจากปลายนิ้วของเส้นเลือดฝอย
เราวัดการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันระดับเซลล์และร่างกายในผู้บริจาคที่มีสุขภาพดีโดยใช้การตรวจหาทีเซลล์ SARS-CoV-2 และแอนติบอดี IgG ร่วมกันโดยอิงจากเลือดดำทั้งหมด (สำหรับลักษณะของผู้เข้าร่วม ดูเดือนมีนาคม 2022 14. ในผู้บริจาคที่ได้รับวัคซีน SARS-CoV-2- การตอบสนองของทีเซลล์จำเพาะถูกกำหนดโดยการวัดระดับพลาสมาอินเตอร์เฟอรอน-γ (IFN-γ) หลังการกระตุ้นเลือดครบส่วนด้วยเปปไทด์ SARS-CoV-2 (เช่นก่อนหน้านี้ อ้างอิง 14,15,16,17,18) และการตอบสนองของ IgG ที่เกี่ยวข้อง ด้วยนิวคลีโอแคปซิด (N) เพิ่มขึ้นในผู้ที่รายงานการติดเชื้อครั้งก่อนแม้ว่าการตอบสนองทั้งสองจะสูงกว่าในผู้บริจาคที่ไม่ได้รับการฉีดวัคซีนที่ติดเชื้อก่อนหน้านี้ แต่จะสูงสุดในร่างกาย (รูปที่ 1a, b) การตอบสนองของ IgG ต่อขัดขวางไกลโคโปรตีน (RBD, S1, S2) สูงที่สุดในผู้บริจาคที่ได้รับการฉีดวัคซีนก่อนหน้านี้ (รูปที่ 1c – e)
การตอบสนองของทีเซลล์ IFN-γ+ ที่จำเพาะต่อ SARS-CoV-2 ถูกวัดโดยการวิเคราะห์เลือดครบส่วนจากหลอดเลือดดำ และอิงตามการฉีดวัคซีนของผู้เข้าร่วมและสถานะการติดเชื้อ SARS-CoV-2 ก่อนหน้า (ยืนยันโดย PCR และ/หรือการทดสอบการไหลด้านข้าง)' Vac + /Inf +' n = 60 (สีเขียว), 'Vac + /Inf-' n = 82 (สีน้ำเงิน), 'Vac-/Inf +' n = 4 (สีเหลือง), 'Vac-/Inf-' n = 1 (ไม่สามารถนำมาใช้).ปฏิกิริยาการจับ IgG ที่จำเพาะต่อ SARS-CoV-2 เป้าหมายนิวคลีโอแคปซิด (“N”) (b; ****P < 0.0001, **P = 0.0016), โดเมนการจับตัวรับที่ถูกแทง (“RBD”) (c; ** P = 0.0022, *P < 0.015), หน่วยย่อยขัดขวาง 1 (“S1”) (d; ***P = 0.0005, *(Vac + /Inf+ เทียบกับ Vac + /Inf-) P = 0.022, *(Vac- /Inf+ เทียบกับ Vac+/Inf-) P = 0.012) และหน่วยย่อยสูงสุด 2 (“S2”) (e) วัดโดยการตรวจเลือดครบจากหลอดเลือดดำและอิงตามการฉีดวัคซีนของผู้เข้าร่วมและ SARS -CoV-2 ก่อนหน้า (ยืนยันโดย PCR และ/ หรือการทดสอบการไหลด้านข้าง) สถานะการติดเชื้อ'Vac + /Inf +' n = 60 (สีเขียว), 'Vac + /Inf-' n = 71-82 (สีน้ำเงิน), 'Vac-/Inf +' n = 4 (สีเหลือง)การเปรียบเทียบดำเนินการโดยใช้การทดสอบครัสคัล-วาลลิส ซึ่งปรับสำหรับการเปรียบเทียบหลายรายการโดยใช้การทดสอบ Dunnข้อมูลจะแสดงเป็นแผนภูมิ (เส้นกึ่งกลางที่ค่ามัธยฐาน ขีดจำกัดบนที่เปอร์เซ็นไทล์ที่ 75 ขีดจำกัดล่างที่เปอร์เซ็นไทล์ที่ 25) โดยมีหนวดที่ค่าต่ำสุดและสูงสุดแต่ละจุดแสดงถึงผู้บริจาคข้อมูลดิบจะถูกจัดเตรียมไว้ในรูปแบบของไฟล์ข้อมูลดิบ
หลังจากการสุ่มตัวอย่างเลือด ผู้เข้าร่วมจะถูกขอให้รายงานผลการทดสอบ PCR เชิงบวก และ/หรือการทดสอบการไหลด้านข้างสำหรับโควิด-19 ด้วยตนเองหากผู้เข้าร่วมมีผลการทดสอบเป็นบวกระหว่างวันที่ 1 กันยายน 2021 ถึง 29 ธันวาคม 2021 พวกเขาจะถูกสันนิษฐานว่าติดเชื้อไวรัสโคโรนาสายพันธุ์เดลต้า (B.1.617.2) และโอไมครอน (B.1.1.529) ไปยังสาธารณสุขเวลส์หลังจากวันที่ 29 ธันวาคม 2021 เมื่อ ตัวเลือกข้อกังวลนี้มีความโดดเด่นในบรรดาผู้บริจาคที่ประเมินได้ 148 ราย เราสังเกตเห็นอัตราการติดเชื้อ 26.3% (39/148) ภายใน 6 เดือนของการบริจาคโลหิต โดย 38 รายในจำนวนนี้ได้รับวัคซีนป้องกันโควิด-19 โดสที่สองหรือสาม (ความก้าวหน้าของการติดเชื้อเกิดขึ้นหลังจากไฟเซอร์/BioNTech ( BNT162b2) วัคซีน mRNA หรือวัคซีน AstraZeneca (ChAdOx1 nCoV-19));ผู้บริจาคที่ไม่ได้รับวัคซีนก็ติดเชื้อเช่นกันขนาดของการตอบสนองของทีเซลล์ที่เป็นบวก IFN-γ-positive เฉพาะ SARS-CoV-2 นั้นต่ำกว่าอย่างมีนัยสำคัญในผู้ที่รายงานการทดสอบวินิจฉัยเชิงบวกสำหรับ COVID-19 มากกว่าในผู้บริจาคที่ไม่ติดเชื้อ (P <0.0001; รูปที่ 2a) สาเหตุหลักมาจาก การเหนี่ยวนำการตอบสนองของ T เซลล์อย่างเหมาะสมที่สุดโดยการฉีดวัคซีนในผู้เข้าร่วมบางคน ( P = 0.050; รูปที่ 1 เพิ่มเติม)ไม่มีความสัมพันธ์ระหว่างขนาดของการตอบสนองของเซลล์ IFN-γ+ และเวลาต่อผลการทดสอบ COVID-19 ที่เป็นบวก (รูปที่ 2 เพิ่มเติม)ในทางตรงกันข้าม ทั้งการตอบสนองของ IgG ที่มีผลผูกพันกับ RBD-, S1-, S2 (รูปที่ 2b – d) หรือการตอบสนองของแอนติบอดีที่ทำให้เป็นกลางของ RBD-, S1 นั้นไม่เฉพาะเจาะจงสำหรับ SARS-CoV-2 ชนิดไวด์หรือเดลต้า (B.1.617)) (รูปที่ 3 เพิ่มเติม) สามารถแยกแยะระหว่างบุคคลที่มีความเสี่ยงต่อการติดเชื้อได้อย่างไรก็ตาม การตอบสนองของ N-linked IgG ที่ต่ำต่อ SARS-CoV-2 มีความสัมพันธ์กับความเสี่ยงของการติดเชื้อ COVID-19 (P = 0.0084; รูปที่ 2e);ผู้ที่ทดสอบผลบวกมีโอกาสน้อยลง 85% (P = 0.00035; หรือ 0.15, 95)% CI: 0.047–0.39 (รูปที่ 4 เพิ่มเติม)
ตัวอย่างเลือดจากหลอดเลือดดำจากผู้บริจาคที่มีสุขภาพดี (n = 148) ประเมินการตอบสนองของ IFN-γ+ ทีเซลล์ที่จำเพาะต่อ SARS-CoV-2 (a; ****P < 0.0001) และการจับกันของ Spike receptor กับ SARS-CoV ที่จำเพาะ -2 สิ่งเร้าโดเมน (“RBD”) (b), หน่วยย่อยขัดขวาง 1 (“S1″) (c), หน่วยย่อยขัดขวาง 2 (“S2″) (d) และนิวคลีโอแคปซิด (“N”) (e; **P = 0.0084 ) .ระบุผู้เข้าร่วมที่ทดสอบผลบวกสำหรับโควิด-19 (PCR และ/หรือการไหลด้านข้าง)การติดเชื้อทั้งหมดเกิดขึ้นภายใน 6 เดือนนับจากการเก็บตัวอย่างเลือดทำการเปรียบเทียบโดยใช้การทดสอบแมนน์-วิทนีย์แบบสองด้านข้อมูลจะแสดงเป็นแผนภูมิ (เส้นกึ่งกลางที่ค่ามัธยฐาน ขีดจำกัดบนที่เปอร์เซ็นไทล์ที่ 75 ขีดจำกัดล่างที่เปอร์เซ็นไทล์ที่ 25) โดยมีหนวดที่ค่าต่ำสุดและสูงสุดแต่ละจุดแสดงถึงผู้บริจาคns นั้นไม่สำคัญแผนที่ความร้อน f แสดงความสัมพันธ์อันดับของ Spearman ระหว่างตัวแปรสำหรับชุดข้อมูลที่ระบุการเปรียบเทียบที่ไม่มีนัยสำคัญทางสถิติถูกแยกออกจากเมทริกซ์และทำเครื่องหมายด้วยเซลล์ว่างข้อมูลดิบจะถูกจัดเตรียมไว้ในรูปแบบของไฟล์ข้อมูลดิบ
ค่าตัดเชิงบวกของการวินิจฉัยที่ตั้งไว้ล่วงหน้าเป็น 14 ถือว่าไม่เหมาะสมเกินกว่าที่จะประเมินความเสี่ยงของการติดเชื้อซ้ำ ดังนั้นจึงมีการกำหนดช่วงควอไทล์เพื่อสร้างพารามิเตอร์ความเสี่ยงสัมบูรณ์แบบจำลองทางสถิติ ซึ่งรวมเฉพาะตัวแปรที่มีผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญต่อผลลัพธ์ แสดงให้เห็นว่าขนาดของการตอบสนองของทีเซลล์ IFN-γ+ ที่จำเพาะต่อ SARS-CoV-2 เป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพทางภูมิคุ้มกันที่สำคัญที่สุดในการพิจารณาโอกาสของแต่ละบุคคลที่จะเป็น ทดสอบหาเชื้อโควิด-19 บวก (รูปที่ 2f และรูปที่ 4 เพิ่มเติม)ผู้ป่วยที่มีการตอบสนองของทีเซลล์ IFN-γ+ ที่จำเพาะต่อ SARS-CoV-2 ในควอร์ไทล์ที่สาม (194-489 พิโกกรัม/มิลลิลิตร IFN-γ) และควอร์ไทล์ที่สี่ (>489 พิโกกรัม/มิลลิลิตร IFN-γ) 65% (P = 0.055; หรือ 0.35, 95% CI: 0.11–1.00) และ 90% (P = 0.0050; หรือ 0.098, 95% CI: 0.014–0.42) มีผู้เข้าร่วมมากกว่าโอกาสมีน้อย (รูปที่ 4 เพิ่มเติม)โดยรวมแล้ว ผู้เข้าร่วมที่มีการตอบสนองของทีเซลล์จำเพาะ SARS-CoV-2 จากเลือดดำ ≤79 พิโกกรัม/มล. IFN-γ มีความเสี่ยง 43.2% ของการติดเชื้อที่ลุกลามอย่างรวดเร็วใน 6 เดือน เทียบกับการตอบสนองที่ >489 พิโกกรัม/มล.IFN-γ 1 มล. มีความเสี่ยงต่อการติดเชื้อ 5.4% (ตารางที่ 2)
การตรวจเลือดครบจากหลอดเลือดดำมีขอบเขตจำกัด เนื่องจากนักโลหิตวิทยาจำเป็นต้องเก็บตัวอย่างเพื่อเพิ่มความพร้อมใช้งานของการทดสอบทีเซลล์และ IgG สำหรับ SARS-CoV-2 จึงได้มีการพัฒนาวิธีการเก็บตัวอย่างเลือดจากเส้นเลือดฝอยทางเลือกเพื่อให้ผู้เข้าร่วมได้รับตัวอย่างเลือดจากปลายนิ้วที่บ้านเท่าที่เราทราบ ยังไม่มีรายงานก่อนหน้านี้เกี่ยวกับการวัดการทำงานของทีเซลล์ที่จำเพาะต่อแอนติเจนในตัวอย่างเลือดจากเส้นเลือดฝอยก่อนหน้านี้มีความสัมพันธ์ที่ชัดเจนระหว่างจำนวนเม็ดเลือดขาวที่ได้รับโดยใช้ตัวอย่างเลือดจากเส้นเลือดฝอยและหลอดเลือดดำที่เทียบเคียงได้นอกจากนี้ มีรายงานว่าการตรวจวิเคราะห์จากเลือดทั้งหมดที่วัดการตอบสนองของทีเซลล์ที่จำเพาะต่อ SARS-CoV-2 นั้นใช้เลือดดำเพียง 320 ไมโครลิตร20 ซึ่งช่วยขจัดความกังวลเกี่ยวกับความถี่ของทีเซลล์ต้นกำเนิดในตัวอย่างเลือดจากเส้นเลือดฝอย
เราใช้การทดสอบร่วมกันที่ได้มาตรฐานที่มีปริมาณงานสูงของเซลล์ SARS-CoV-2 และแอนติบอดี IgG โดยอิงจากเลือดครบส่วนในเส้นเลือดฝอยเพื่อวัดการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันของเซลล์และร่างกายในผู้เข้าร่วมที่มีโรคร่วมต่างๆ และสถานะการฉีดวัคซีน/การติดเชื้อก่อนหน้า (ตารางที่ 1)คัดเลือกจากทั่วสหราชอาณาจักรระหว่างวันที่ 24 มกราคม ถึง 14 มีนาคม 256214 ตัวอย่างนิ้วส่วนใหญ่ (90.9%) ได้รับอย่างถูกต้องและส่งไปยังห้องปฏิบัติการภายใน 24 ชั่วโมงหลังการเก็บตัวอย่างในบางกรณี ได้รับตัวอย่างภายใน 48 ชั่วโมงหลังการเจาะเลือด แต่ไม่มีตัวอย่างใดผ่านการตรวจสอบการควบคุมคุณภาพ และไม่ส่งผลกระทบต่อการวัดทีเซลล์หรือแอนติบอดีโดยรวม (รูปที่ 5 เพิ่มเติม)แม้ว่าขนาดของการตอบสนองของทีเซลล์ IFN-γ+ เฉพาะ SARS-CoV-2 จะมีความแตกต่างกันที่วัดในตัวอย่างเลือดของเส้นเลือดฝอยและหลอดเลือดดำตามลำดับในบุคคลบางคน แต่ก็ไม่มีความแตกต่างที่มีนัยสำคัญโดยรวม (P = 0.88; รูปที่ 6 เพิ่มเติม) ).).
การตอบสนองของทีเซลล์ IFN-γ+ ที่จำเพาะต่อ SARS-CoV-2 เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในผู้ที่ได้รับการฉีดวัคซีนซึ่งรายงานการติดเชื้อครั้งก่อนด้วย (P = 0.0001) แต่ไม่สูงกว่าในผู้บริจาคที่ไม่ได้รับวัคซีนที่ติดเชื้อก่อนหน้านี้อย่างมีนัยสำคัญ ( P = 0.19, รูปที่. 3ก)).การตอบสนองของ IgG ต่อสไปค์ไกลโคโปรตีน (RBD, S1, S2) นั้นสูงกว่าผู้บริจาคที่ได้รับการฉีดวัคซีนอย่างมีนัยสำคัญมากกว่าผู้บริจาคที่ไม่ได้รับการฉีดวัคซีน โดยไม่คำนึงถึงสถานะการติดเชื้อก่อนหน้า (รูปที่ 3b-d)สิ่งที่น่าสนใจคือค่าเฉลี่ยการตอบสนองของ IgG แบบ N-bound นั้นสูงที่สุดในผู้เข้าร่วมที่ไม่ได้รับการฉีดวัคซีนก่อนหน้านี้เมื่อเปรียบเทียบกับผู้เข้าร่วมที่ได้รับการฉีดวัคซีน แม้ว่าสิ่งนี้จะไม่ถึงความสำคัญก็ตาม (รูปที่ 3e)ในบรรดาผู้บริจาคที่ไม่ได้รับวัคซีนและไม่ติดเชื้อซึ่งประกาศตนเอง ผู้เข้าร่วม 15 รายจาก 37 ราย (40.5%) มีผลบวกต่อ N-linked IgG ซึ่งสูงกว่าเกณฑ์ที่กำหนดไว้ก่อนหน้านี้ที่ 2.0 BAU/mL14;ผู้เข้าร่วม 15 รายนี้ ผู้ป่วย 12 รายมีผลการทดสอบผลบวกต่อการตอบสนองของทีเซลล์ IFN-γ+ ซึ่งสูงกว่าเกณฑ์ที่กำหนดไว้ก่อนหน้านี้ที่ 22.7 พิโกกรัม/มล. IFN-γ14ดังนั้นจึงเป็นไปได้ว่าผู้เข้าร่วมเหล่านี้เคยติดเชื้อ SARS-CoV-2 มาก่อน และไม่ได้ตรวจหาเชื้อ COVID-19 เนื่องจากทางเลือกส่วนบุคคล ขาด PCR และ/หรืออุปกรณ์การไหลด้านข้าง หรือไม่แสดงอาการแม้ว่าจะมีความสัมพันธ์อย่างมีนัยสำคัญระหว่างการตอบสนองของ T เซลล์ต่อระดับ IFN-γ + และ N-linked IgG ในผู้บริจาคที่ไม่ได้รับการฉีดวัคซีน ( P = 0.0044; รูปที่เสริม, การตอบสนองของ N-linked IgG ลดลงเร็วกว่าการตอบสนองของ N-linked IgG ในขณะที่ IFN-γ + การตอบสนองของทีเซลล์ได้รับการดูแลโดยไม่คำนึงถึงสถานะการฉีดวัคซีน แม้ว่าจำนวนผู้บริจาคในช่วง 50 สัปดาห์หลังความท้าทายจะต่ำ (รูปที่ 8 เพิ่มเติม) โดยทั่วไปประเภทของการฉีดวัคซีนจะแตกต่างกันเล็กน้อยในการตอบสนองของ IgG ที่สังเกตได้โดยเฉพาะสำหรับ SARS-CoV- 2, T เซลล์และ RBD ที่เกี่ยวข้อง แม้ว่าผู้เข้าร่วมที่ได้รับ BNT162b2 สองโดสตามด้วยการฉีดวัคซีน mRNA1273 แสดงให้เห็นว่าระดับของเซลล์ IFN-γ + T ที่สูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญมีความไวต่อ SARS-CoV-2 มากกว่าผู้ที่ได้รับ ChAdOx1 และ BNT162b2 สองโดส (เสริม) รูปที่ 9) นอกจากนี้ รายงานโรคร่วมมีความแตกต่างโดยรวมเล็กน้อยในการตอบสนองของทีเซลล์ที่สังเกตได้ เมื่อเปรียบเทียบกับผู้บริจาคที่มีสุขภาพดี (รูปที่ 10 เพิ่มเติม)
การตอบสนองของทีเซลล์ IFN-γ+ ที่จำเพาะต่อ SARS-CoV-2 ถูกวัดโดยการทดสอบเส้นเลือดฝอยครบส่วน และอิงตามการฉีดวัคซีนของผู้เข้าร่วมและสถานะการติดเชื้อ SARS-CoV-2 ก่อนหน้า (ยืนยันโดย PCR และ/หรือการทดสอบการไหลด้านข้าง)'Vac + /Inf +' n = 42 (สีเขียว), 'Vac + /Inf-' n = 158 (สีน้ำเงิน), 'Vac-/Inf +' n = 33 (สีเหลือง), 'Vac- /Inf-' n = 37 (สีเทา)****P < 0.0001, ***P = 0.0001, *(Vac+/Inf- เทียบกับ Vac-/Inf-) P = 0.045, *(Vac-/Inf+ เทียบกับ Vac- /Inf-) P = 0.014 .ปฏิกิริยาการจับ IgG ที่จำเพาะต่อ SARS-CoV-2 ต่อโดเมนการจับตัวรับสไปค์ (“RBD”) (b; ****P < 0.0001, ns: ไม่มีนัยสำคัญ), หน่วยย่อยสไปค์ 1 (“S1”) (c; * * **P < 0.0001, ns: ไม่มีนัยสำคัญ), หน่วยย่อยขัดขวาง 2 (“S2″) (d; ****P < 0.0001, ***P = 0.0005, *P = 0.016 ) และนิวคลีโอแคปซิด (“N”) (e; ****P < 0.0001, ns ไม่มีนัยสำคัญ) วัดโดยใช้การวิเคราะห์เลือดครบหลอดเลือดดำและขึ้นอยู่กับการฉีดวัคซีนของผู้เข้าร่วมและ SARS-CoV-2 ก่อนหน้า (ยืนยันโดย PCR และ/หรือการวิเคราะห์การไหลด้านข้าง) การติดเชื้อแบ่งย่อยโดย สถานะ.'Vac + /Inf +' n = 46 (สีเขียว), 'Vac + /Inf-' n = 182 (สีน้ำเงิน), 'Vac-/Inf +' n = 34 (สีเหลือง), 'Vac-/Inf-' n = 37 (สีเทา)การเปรียบเทียบดำเนินการโดยใช้การทดสอบครัสคัล-วาลลิส ซึ่งปรับสำหรับการเปรียบเทียบหลายรายการโดยใช้การทดสอบ Dunnข้อมูลจะแสดงเป็นแผนภูมิ (เส้นกึ่งกลางที่ค่ามัธยฐาน ขีดจำกัดบนที่เปอร์เซ็นไทล์ที่ 75 ขีดจำกัดล่างที่เปอร์เซ็นไทล์ที่ 25) โดยมีหนวดที่ค่าต่ำสุดและสูงสุดแต่ละจุดแสดงถึงผู้บริจาคข้อมูลดิบจะถูกจัดเตรียมไว้ในรูปแบบของไฟล์ข้อมูลดิบ
เช่นเดียวกับก่อนหน้านี้ ผู้เข้าร่วมจะถูกขอให้รายงาน PCR เชิงบวกและ/หรือผลการไหลเวียนของเลือดด้านข้างสำหรับโรคโควิด-19จากข้อมูลของหน่วยงานด้านสุขภาพของสหราชอาณาจักร ผู้เข้าร่วมได้รับการสันนิษฐานว่าติดเชื้อ Omicron coronavirus (B.1.1.529) ในขณะที่ทำการทดสอบตัวแปรไวรัสที่ให้ผลบวก เนื่องจากเป็นตัวแปรหลักในสหราชอาณาจักรในช่วงระยะเวลาการศึกษาในบรรดาผู้บริจาคที่ประเมินได้ 299 ราย เราสังเกตเห็นอัตราการติดเชื้อ 8.0% (24/299) ภายในสามเดือนของการบริจาคเส้นเลือดฝอย โดยเจ็ดรายไม่ได้รับการฉีดวัคซีนสัดส่วนของการเจ็บป่วยร่วมระหว่างผู้เข้าร่วมทั้งหมดตํ่ากว่าในกลุ่มผู้ที่ตรวจพบโรคโควิด-19 ในเชิงบวก (10.7%) มากกว่าผู้ที่ตรวจพบโรคโควิด-19 เป็นลบ (24.4% ตารางที่ 1) ซึ่งอาจเนื่องมาจากข้อเท็จจริงที่ว่าผู้เข้าร่วมที่มี โรคต่างๆ จะต้องระมัดระวังมากขึ้นและป้องกันผลที่ตามมาที่อาจเกิดขึ้น เช่น โรคเบาหวานและมะเร็งดังที่สังเกตในกลุ่มเลือดดำ T เซลล์ที่จำเพาะต่ออินเตอร์เฟอรอน-γ (IFN-γ)-จำเพาะของ SARS-CoV-2 ซึ่งวัดในตัวอย่างเลือดฝอยจากบุคคลที่รายงานผลการทดสอบวินิจฉัยเชิงบวกสำหรับโควิด-19ขนาดการตอบสนองต่ำกว่าในผู้บริจาคที่ไม่ติดเชื้ออย่างมีนัยสำคัญ ( P = 0.034; รูปที่ 4a) เนื่องจากการเหนี่ยวนำการตอบสนองของ T เซลล์ค่อนข้างแย่โดยการฉีดวัคซีนและ / หรือการติดเชื้อก่อนหน้า (รูปที่ 11 เพิ่มเติม)ในทำนองเดียวกันการตอบสนองของ IgG ที่มีผลผูกพันกับ RBD-, S1-, S2 (รูปที่ 4b – d) หรือการตอบสนองของแอนติบอดีที่ทำให้เป็นกลางของ RBD-, S1 นั้นไม่เฉพาะเจาะจงสำหรับ SARS-CoV-2 ชนิดไวด์หรือเดลต้า (B. 1.617)(รูปที่ 12 เพิ่มเติม)สามารถระบุบุคคลที่มีความเสี่ยงสูงต่อการติดเชื้อได้ตรงกันข้ามกับกลุ่มเลือดดำ การตอบสนองของ IgG ที่เกี่ยวข้องกับ N ก็ไม่ได้แยกความแตกต่างความเสี่ยงของ COVID-19 (รูปที่ 4e) ซึ่งบ่งชี้ว่าตัวแปร Omicron (B.1.1.529) เพิ่มการหลีกเลี่ยงภูมิคุ้มกันในผู้ติดเชื้อก่อนหน้านี้ ดังที่อธิบายไว้ล่าสุด 21 ในทางตรงกันข้าม ความแรงของการตอบสนองของเซลล์ IFN-γ ทีเซลล์ที่จำเพาะต่อ SARS-CoV-2 นั้นเป็นตัวแปรที่สำคัญที่สุดอีกครั้งในการพิจารณาโอกาสที่จะทดสอบผลบวกของเชื้อโควิด-19 แต่ละคน (รูปที่ 4f)โดยรวมแล้ว ผู้เข้าร่วมที่มีการตอบสนองของ T-cell ของเส้นเลือดฝอยที่จำเพาะต่อ SARS-CoV-2 ≤23.7 pg/mL IFN-γ มีความเสี่ยง 14.9% ของการติดเชื้อในเวลาสามเดือน เมื่อเทียบกับการตอบสนองที่ >141.6 pg/mLมล. ไอเอฟเอ็น.-γมีความเสี่ยงต่อการติดเชื้อ 4.4% (ตารางที่ 2)
การตอบสนองของทีเซลล์ IFN-γ+ โดยเฉพาะสำหรับ SARS-CoV-2 (a; *P = 0.034) และโดเมนการจับตัวรับที่กำหนดเป้าหมาย IgG โดยเฉพาะ (“RBD”) (b), หน่วยย่อยขัดขวาง 1 (' S1 ′) (c), หน่วยย่อยขัดขวาง 2 ('S2′) (d) และปฏิกิริยาการจับกับนิวคลีโอแคปซิด ('N') (e)ผู้เข้าร่วมที่ได้รับการระบุว่าเป็นผลบวกสำหรับการทดสอบ COVID-19 (PCR และ/หรือการทดสอบการไหลเวียนของเลือดด้านข้าง) การติดเชื้อทั้งหมดเกิดขึ้นภายใน 3 เดือนนับจากการเก็บตัวอย่างเลือดทำการเปรียบเทียบโดยใช้การทดสอบแมนน์-วิทนีย์แบบสองด้านข้อมูลจะแสดงเป็นแผนภูมิ (เส้นกึ่งกลางที่ค่ามัธยฐาน ขีดจำกัดบนที่เปอร์เซ็นไทล์ที่ 75 ขีดจำกัดล่างที่เปอร์เซ็นไทล์ที่ 25) โดยมีหนวดที่ค่าต่ำสุดและสูงสุดแต่ละจุดแสดงถึงผู้บริจาคns นั้นไม่สำคัญแผนที่ความร้อน f แสดงความสัมพันธ์อันดับของ Spearman ระหว่างตัวแปรสำหรับชุดข้อมูลที่ระบุการเปรียบเทียบที่ไม่มีนัยสำคัญทางสถิติถูกแยกออกจากเมทริกซ์และทำเครื่องหมายด้วยเซลล์ว่างข้อมูลดิบจะถูกจัดเตรียมไว้ในรูปแบบของไฟล์ข้อมูลดิบ
เมื่อเราก้าวเข้าสู่ระยะต่อไปของการแพร่ระบาดของโควิด-19 การมุ่งเน้นจะเปลี่ยนจากการป้องกันไปสู่การบริหารความเสี่ยงส่วนบุคคลและการระบุสมาชิกที่อ่อนแอในสังคมการสร้างความสัมพันธ์ระหว่างภูมิคุ้มกันต่อโรคโควิด-19 ถือเป็นสิ่งสำคัญในการระบุและรักษากลุ่มที่มีความเสี่ยงสูงเหล่านี้ได้อย่างมีประสิทธิภาพขณะนี้มีหลักฐานเพิ่มมากขึ้นว่าภูมิคุ้มกันของทีเซลล์ป้องกันการติดเชื้อ SARS-CoV-2 และจำกัดความรุนแรงของโควิด-1910ข้อมูลที่นำเสนอในที่นี้แสดงให้เห็นว่าความแข็งแกร่งรวมกันของการตอบสนองของเซลล์ IFN-γ+ ทีเซลล์ที่จำเพาะต่อ SARS-CoV-2 ต่อโปรตีนที่มีโครงสร้างแหลม เยื่อหุ้มเซลล์ และนิวคลีโอแคปซิด ให้การปกป้องต่อโรคโควิด-19 ได้ดีกว่าการจับกับแอนติบอดี19 ส่งเสริมหรือทำให้การตอบสนองเป็นกลาง .และควรนำมาพิจารณาเมื่อประเมินภูมิคุ้มกันส่วนบุคคลและ/หรือฝูงไวรัส RNA เช่น SARS-CoV-2 หรือไวรัสไข้หวัดใหญ่ A (IAV) หลีกเลี่ยงการทำให้เป็นกลางทางซีรัมวิทยาโดยการพัฒนาอีพิโทปของ B-cell ที่เปิดเผยอย่างรวดเร็วบนแอนติเจนที่พื้นผิวที่แอนติบอดีจดจำได้การตอบสนองทางภูมิคุ้มกันเชิงป้องกันที่ทีเซลล์อาจสะท้อนถึงการกำหนดเป้าหมายของอีพิโทปจากบริเวณที่ได้รับการอนุรักษ์ไว้มากกว่าของโปรตีนของไวรัส ซึ่งไม่สามารถหลบหนีการตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกันได้อย่างรวดเร็วการป้องกันโดยใช้ทีเซลล์เป็นสื่อกลางต่อสายพันธุ์ SARS-CoV-2 ชนิดใหม่นั้นคล้ายคลึงกับการป้องกันแบบเฮเทอโรซับไทป์ที่อาศัยการกำหนดเป้าหมายทีเซลล์ของโปรตีนจากภายในที่ได้รับการอนุรักษ์ซึ่งพบในชนิดย่อย IAV22,23
แม้จะมีศักยภาพมหาศาลในการวัดการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันของเซลล์ต่อโรคโควิด-19 แต่ก็ไม่ค่อยได้รับความสนใจมากนักในการพัฒนาการตรวจวิเคราะห์ทีเซลล์ที่แม่นยำ ปริมาณงานสูง และได้มาตรฐานความซับซ้อนและต้นทุนแบบดั้งเดิมที่เกี่ยวข้องกับการวัดการตอบสนองของทีเซลล์ทำให้ไม่สามารถระบุภูมิคุ้มกันของทีเซลล์ได้อย่างแม่นยำ เมื่อทำการคัดกรองภูมิคุ้มกันของประชากรจำนวนมากแม้ว่าชุดทดสอบการกระตุ้นเปปไทด์ของเลือดครบส่วนเชิงพาณิชย์หลายรายการจะมีให้บริการเมื่อเร็วๆ นี้ แต่ในปัจจุบันทุกคนจำเป็นต้องมีนักเจาะเลือดเพื่อรับเลือด ซึ่งจำกัดความพร้อมและขนาดระบบเลือดฝอยถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายเพื่อตรวจสอบความชุกของแอนติบอดีต่อเชื้อ SARS-CoV-2 ในประชากรเราปรับการตรวจเลือดจากเส้นเลือดฝอยเพื่อทำการตรวจกระตุ้นเปปไทด์ของเลือดครบส่วนเพื่อประเมินปฏิกิริยาของทีเซลล์ต่อโปรตีนโครงสร้าง SARS-CoV-2 และการตอบสนองของแอนติบอดีจำเพาะของ SARS-CoV-2ในความเป็นจริง การตรวจวัดแอนติบอดีที่จำเพาะต่อ SARS-CoV-2 และทีเซลล์ในตัวอย่างเลือดจากเส้นเลือดฝอยเดียวกันรวมกันนั้นน่าสนใจมาก: (i) ลดความจำเป็นในการตรวจเลือดหลายครั้งต่อผู้เข้าร่วมแต่ละคน (ii) ปรับปรุงประสบการณ์และความเข้าใจของผู้เข้าร่วม ;(iii) ปรับปรุงการขนส่งและลดความซ้ำซ้อน (iv) ลดผลกระทบต่อสิ่งแวดล้อม เนื่องจากต้องใช้วัสดุสิ้นเปลืองในห้องปฏิบัติการและการจัดส่งตัวอย่างน้อยลงแม้ว่าปฏิกิริยา IFN-γ โดยรวมจะคล้ายกันระหว่างตัวอย่างเลือดจากหลอดเลือดดำและเส้นเลือดฝอยที่ตรงกัน แต่ก็พบว่าในกลุ่มเลือดฝอยของผู้เข้าร่วม (รูปที่ 4a) ต่ำกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มเลือดดำ (รูปที่ 2a)ค่า IFN-γ มีคำอธิบายหลายประการสำหรับการค้นพบนี้ กล่าวคือ ผู้เข้าร่วมจำนวนมากที่มีโรคร่วมที่ต้องได้รับการบำบัดด้วยภูมิคุ้มกันถูกคัดเลือกเข้าในกลุ่มตัวอย่างเลือดจากเส้นเลือดฝอย (ตารางที่ 1) และความมีชีวิตและ/หรือการทำงานของทีเซลล์ที่ได้รับจากหลอดเลือด ตัวอย่างอาจมีน้อย โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อคำนึงถึงเงื่อนไขของการเก็บตัวอย่างในระยะยาวก่อนการกระตุ้นเปปไทด์
วัคซีนป้องกันโควิด-19 ที่มีจำหน่ายกันอย่างแพร่หลายในปัจจุบันให้การป้องกันโรคร้ายแรงได้ดีที่สุดสำหรับผู้รับส่วนใหญ่ภายใน 6 เดือนหลังการฉีดวัคซีน8น่าให้กำลังใจ แม้ว่าการวางตัวเป็นกลางทางเซรุ่มวิทยาของเชื้อ SARS-CoV-26,7 ที่เกิดจากวัคซีนได้ไม่ดี แต่การตอบสนองของ T-cell ที่เกิดจากการฉีดวัคซีนป้องกัน SARS-CoV-2 ชนิดพันธุ์ป่ายังคงมีปฏิกิริยาสูง โดยมีอีก 25 ชนิดเกิดขึ้นข้อมูลที่เรานำเสนอที่นี่แสดงให้เห็นถึงความสำคัญของการประเมินภูมิคุ้มกันของวัคซีนในวงกว้าง โดยเน้นที่วัคซีนที่มีภูมิคุ้มกันของทีเซลล์ไม่เพียงพอเพื่อป้องกันการติดเชื้อกะทันหันและการแพร่เชื้อไวรัสอย่างต่อเนื่องนอกจากนี้เรายังตั้งข้อสังเกตว่าบุคคลที่ไม่ได้รับการฉีดวัคซีนจำนวนมากที่ถูกคัดเลือกเข้าสู่กลุ่มเส้นเลือดฝอยมีการตอบสนองอย่างมีนัยสำคัญของเซลล์ T ที่จำเพาะต่อ SARS-CoV-2 (และ IgG ที่มีผลผูกพันกับ N) โดยไม่คำนึงถึงการฉีดวัคซีนครั้งก่อน ซึ่งอาจเกิดจากการติดเชื้อครั้งก่อนแทนที่จะฉีดวัคซีนให้กับบุคคลที่เหมาะสม ควรประเมินความเสี่ยงต่อการติดเชื้อโดยพิจารณาจากสถานะการสร้างภูมิคุ้มกันในปัจจุบันและตัวเลือกที่มีข้อมูลครบถ้วน
ข้อจำกัดของการศึกษานี้รวมถึงการรับประกันว่าผู้เข้าร่วมรายงานการติดเชื้อ SARS-CoV-2 ด้วยตนเองหลังการเก็บเลือดเพื่อพิจารณาความเกี่ยวข้องของภูมิคุ้มกันผู้เข้าร่วมบางรายอาจมีการติดเชื้อที่ไม่มีอาการและไม่สามารถเข้ารับการตรวจ PCR และ/หรือการตรวจการไหลด้านข้างสำหรับโรคโควิด-19 ได้ชุดข้อมูลของเรายังขาดข้อมูลเกี่ยวกับยาของผู้เข้าร่วมในขณะที่เก็บตัวอย่างเลือดนอกจากนี้ เนื่องจากผู้เข้าร่วมของเรารายงานเพียงอาการไม่รุนแรงหรือปานกลางหรือไม่มีอาการใดๆ จึงไม่สามารถระบุการตอบสนองของภูมิคุ้มกันจากชุดข้อมูลของเราที่คาดการณ์ความเสี่ยงที่เพิ่มขึ้นของการเจ็บป่วยรุนแรงและการเข้ารับการรักษาในโรงพยาบาลสำหรับ COVID-19อย่างไรก็ตาม การมีอยู่ของการตอบสนองของ CD8+ ทีเซลล์ต่อเอพิโทปที่จำเพาะต่อนิวคลีโอแคปซิดนั้นมีความเกี่ยวข้องกับการป้องกันโควิด-1926 ที่รุนแรงเมื่อเร็ว ๆ นี้นอกจากนี้ การทดสอบที่ใช้ในที่นี้ไม่ได้วัดการตอบสนองของทีเซลล์ต่อโปรตีนที่ไม่ใช่โครงสร้าง SARS-CoV-2 ที่แสดงออกในระยะเริ่มแรก ซึ่งแสดงให้เห็นว่าเมื่อเร็วๆ นี้มีการสะสมเป็นพิเศษในบุคลากรทางการแพทย์ที่ทำซีโรเนกาทีฟซึ่งติดต่อกับผู้ป่วยที่ติดเชื้อจากงานนี้ เมื่อพิจารณาถึงความชุกของการแพร่เชื้อในชุมชน ณ เวลาที่รับสมัครงาน และมีโอกาสสูงที่จะเกิดการติดเชื้อจากการสัมผัสในประชากร จำนวนทีเซลล์ที่จำเพาะต่อ SARS-CoV-2 ที่พบในการทดสอบของเราก็ดูเหมือนจะสามารถกวาดล้างได้เช่นกันการติดเชื้อแบบไม่แสดงอาการในกลุ่มประชากรของเราในที่สุด เราไม่ได้วัดการผลิต interleukin 2 โดยทีเซลล์ เนื่องจากงานก่อนหน้านี้ของเราแสดงให้เห็นการระบุการตอบสนองของ T-cell เฉพาะ SARS-CoV-214 ที่ไม่ดี แม้ว่าการตอบสนองเฉพาะของ IL-2 อาจบ่งบอกถึงปฏิกิริยาข้ามที่มีอยู่ก่อนแล้วเซลล์ที่เกี่ยวข้องกับการป้องกันการติดเชื้อ SARS-CoV-211
เมื่อนำมารวมกัน ข้อมูลเหล่านี้เน้นย้ำถึงความจำเป็นพื้นฐานสำหรับการศึกษาระยะยาวระยะยาวที่รวมการตอบสนองของทีเซลล์ที่จำเพาะต่อ SARS-CoV-2 เข้ากับการวัดภูมิคุ้มกันในระดับประชากรความพยายามเหล่านี้อาจได้รับความช่วยเหลือจากการพัฒนาการทดสอบเลือดฝอยแบบใหม่ที่ใช้วัดการตอบสนองของทีเซลล์
โครงการวิจัยได้คัดเลือกผู้เข้าร่วมตั้งแต่เดือนกุมภาพันธ์ 2021 ถึงเดือนมีนาคม 2022 กลุ่มผู้บริจาคที่มีสุขภาพดี (n = 148) ที่บริจาคตัวอย่างเลือดจากหลอดเลือดดำประกอบด้วยเจ้าหน้าที่มหาวิทยาลัยและนักศึกษาที่เข้าร่วมบริการตรวจคัดกรองโรคโควิด-19 ของมหาวิทยาลัยคาร์ดิฟฟ์หรือเจ้าหน้าที่ที่โรงเรียนประถมศึกษาใน คาร์ดิฟฟ์ผู้เข้าร่วมทุกคนมีสุขภาพแข็งแรงและไม่ได้รายงานว่ารับประทานยากดภูมิคุ้มกันใดๆ (ดูตารางที่ 1 สำหรับลักษณะเฉพาะ)กลุ่มผู้เข้าร่วมที่บริจาคตัวอย่างเลือดจากเส้นเลือดฝอยประกอบด้วยผู้บริจาคโดยสมัครใจทั้งหมด (อายุ 18 ปีขึ้นไป) จากทั่วสหราชอาณาจักรระหว่างวันที่ 24 มกราคม ถึง 14 มีนาคม พ.ศ. 2565 มีผู้เข้าร่วมการศึกษา 342 ราย โดยในจำนวนนี้ 299 รายได้ส่งตัวอย่างเลือดไปที่ห้องปฏิบัติการผู้เข้าร่วมจำนวนมากยังคงไม่ได้รับการฉีดวัคซีนและ/หรือรายงานโรคร่วมที่ร้ายแรง รวมถึงโรคแพ้ภูมิตัวเองและมะเร็ง (ดูตารางที่ 1 สำหรับลักษณะเฉพาะ)การศึกษานี้ได้รับการอนุมัติทางจริยธรรมจากคณะกรรมการจริยธรรมการวิจัย Newcastle และ North Tyneside 2 (ID IRAS: 294246) และคณะกรรมการจริยธรรมการวิจัยคณะแพทยศาสตร์มหาวิทยาลัยคาร์ดิฟฟ์ (SREC อ้างอิง: SMREC 21/01)ผู้เข้าร่วมทุกคนให้ความยินยอมเป็นลายลักษณ์อักษรก่อนที่จะรวมผู้เข้าร่วมไม่ได้รับค่าตอบแทนใดๆ สำหรับการเข้าร่วมในการศึกษาครั้งนี้
เก็บตัวอย่างเลือดจากหลอดเลือดดำโดยการเจาะเลือดด้วยหลอดเลือดดำลงในเครื่องแวคิวเทนเนอร์ลิเธียมหรือโซเดียมเฮปาริน (BD) ขนาด 6 หรือ 10 มล.เก็บตัวอย่างเลือดจากเส้นเลือดฝอยด้วยมีดหมอปลายนิ้ว จากนั้นเก็บในคอนเทนเนอร์ไมโครเฮพาริน (BD)จำเป็นต้องมีเลือดอย่างน้อย 400 µl;ตัวอย่างใดๆ ที่น้อยกว่าจำนวนนี้จะถูกปฏิเสธเหตุผลอื่นสำหรับการปฏิเสธตัวอย่าง ได้แก่ การแข็งตัวของเลือดจำนวนมากและ/หรือภาวะเม็ดเลือดแดงแตก และความล้มเหลวในการรวบรวมพลาสมาที่มีความหนืดเพื่อการวิเคราะห์ (รูปที่ 5 เพิ่มเติม)มีตัวอย่างเลือดเส้นเลือดฝอยทั้งหมด 299 ตัวอย่างสำหรับการประเมินการตอบสนองของแอนติบอดี โดยมีตัวอย่าง 270 ตัวอย่างสำหรับการประเมินการตอบสนองของทีเซลล์ด้วย
การตอบสนองของทีเซลล์จำเพาะของ SARS-CoV-2 ได้รับการประเมินโดยใช้การทดสอบ COVID-19 Immuno-T (ImmunoServ Ltd) และดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้โดยสรุป วัคซีนหลอดเลือดดำโซเดียมเฮปาริน (BD) ขนาด 6 มิลลิลิตรหรือ 10 มิลลิลิตรหนึ่งตัวถูกนำมาจากผู้เข้าร่วมแต่ละรายและดำเนินการในห้องปฏิบัติการภายใน 12 ชั่วโมงหลังการเก็บเลือดแม้ว่าตัวอย่างส่วนใหญ่จะได้รับการประมวลผลภายใน 24 ชั่วโมง แต่เลือดฝอยจากเส้นเลือดฝอยชนิดเฮปารินไนซ์ (BD) ขนาด 400–600 ไมโครลิตรหนึ่งชิ้นจะถูกเก็บภายใน 48 ชั่วโมงหลังจากการสุ่มตัวอย่างด้วยปลายนิ้วตัวอย่างเลือดจากหลอดเลือดดำและ/หรือเส้นเลือดฝอยถูกกระตุ้นด้วยเปปไทด์พูลแยกต่างหากสำหรับ SARS-CoV-2 (ตัวแปรชนิดไวด์) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ไลบรารีเปปไทด์นี้มีลำดับ 15-mer 420 ลำดับพร้อมกรดอะมิโน 11 ตัวที่ทับซ้อนกันซึ่งครอบคลุมโปรตีนขัดขวางทั้งหมด (S1 และ S2) (S; โปรตีน NCBI: QHD43416 1), นิวคลีโอแคปซิดฟอสโฟโปรตีน (NP; โปรตีน NCBI: QHD43423 2) และเมมเบรนไกลโคโปรตีน (M ; โปรตีน NCBI: QHD43419 1) ลำดับการเข้ารหัส (เรียกว่า “ไลบรารีเปปไทด์ S-/NP-/M-combinatorial”)เปปไทด์ทั้งหมดถูกทำให้บริสุทธิ์ถึง >70% ละลายในน้ำปลอดเชื้อ และใช้ที่ความเข้มข้นสุดท้ายที่ 0.5 ไมโครกรัม/มิลลิลิตรต่อเปปไทด์ตัวอย่างถูกบ่มที่ 37°C เป็นเวลา 20-24 ชั่วโมงจากนั้นนำหลอดไปปั่นเหวี่ยงที่ 5,000×กรัม เป็นเวลา 3 นาที และเก็บพลาสมาประมาณ 150 ไมโครลิตรจากด้านบนของตัวอย่างเลือดแต่ละตัวอย่างเก็บตัวอย่างพลาสมาที่อุณหภูมิ -20°C เป็นเวลาสูงสุดหนึ่งเดือนก่อนดำเนินการตรวจวิเคราะห์ไซโตไคน์/แอนติบอดี
IFN-γ วัดโดยใช้ชุด IFN-γ ELISA MAX Deluxe (BioLegend หมายเลขแค็ตตาล็อก 430116) และดำเนินการตามคำแนะนำของผู้ผลิตทันทีหลังจากเติมสารละลายหยุด (2N H2SO4) ไมโครเพลทจะถูกอ่านที่ 450 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านเพลท BioLegend Mini ELISAIFN-γ ถูกหาปริมาณโดยการประมาณค่าเส้นโค้งมาตรฐานโดยใช้ GraphPad Prismค่าที่ต่ำกว่าขีดจำกัดการตรวจจับด้านล่างของการทดสอบจะถูกบันทึกเป็น 7.8 พิโกกรัม/มิลลิลิตร ค่าที่สูงกว่าขีดจำกัดการตรวจจับด้านบนของการทดสอบจะถูกบันทึกเป็น 1,000 พิโกกรัม/มิลลิลิตร
แอนติบอดีต่อต้าน SARS-CoV-2 RBD/S1/S2/N IgG ถูกวัดโดยใช้แผง Bio-Plex Pro Human IgG SARS-CoV-2 4-plex (Bio-Rad, cat. no. 12014634) และติดป้ายกำกับตาม คำแนะนำของผู้ผลิตคำแนะนำ .ตัวอย่างที่รายงานค่าที่เกินขีดจำกัดของปริมาณได้รับการวิเคราะห์ซ้ำที่การเจือจาง 1:1000ความเข้มของแสงเรืองแสงโดยเฉลี่ยของเม็ดบีดถูกวัดด้วยเครื่องมือ Bio-Plex 200 (Bio-Rad)ความเข้มข้นของแอนติบอดีคำนวณโดย VIROTROL SARS-CoV-2 single control assay (Bio-Rad) และแปลงเป็นหน่วยมาตรฐานอ้างอิงระหว่างประเทศ 20/136 ของ WHO/NIBSC (BAU/mL) โดยใช้ปัจจัยการสอบเทียบของผู้ผลิต
แอนติบอดีที่ทำให้เป็นกลางเฉพาะหน่วยย่อย RBD และ S1 ต่อต้าน SARS-CoV-2 ชนิด wild และเดลต้า (B.1.617) กลุ่ม SARS-CoV-2 ถูกวัดโดยใช้ชุดแอนติบอดีการทำให้เป็นกลางของ Bio-Plex Pro Human SARS-CoV-2 (Bio -Rad หมายเลขชิ้นส่วน 12016897) ตามคำแนะนำของผู้ผลิตวัดความเข้มของแสงฟลูออเรสเซนต์โดยเฉลี่ยบน Bio-Plex 200 (Bio-Rad) และคำนวณเปอร์เซ็นต์การยับยั้ง (เช่น การทำให้เป็นกลาง) โดยใช้สูตรต่อไปนี้:
การตรวจการวางตัวเป็นกลางของการติดเชื้อสำหรับ SARS-CoV-2 ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้าโดยสรุป SARS-CoV-2 ชนิดพันธุ์ป่า 600 PFU ได้รับการบ่มด้วยการเจือจางพลาสมาแบบอนุกรม 3 เท่าที่ซ้ำกันเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ 37°Cจากนั้นของผสมถูกเติมไปยังเซลล์ VeroE6 เป็นเวลา 48 ชั่วโมงชั้นเดียวได้รับการแก้ไขด้วยพาราฟอร์มัลดีไฮด์ 4%, ซึมผ่านได้ด้วย 0.5% NP-40 และบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมงในบัฟเฟอร์ขัดขวาง (PBS ที่มีทวีน 0.1% และนมพร่องมันเนย 3%)แอนติบอดีปฐมภูมิ (สารต้านนิวคลีโอแคปซิด 1C7, สตราเทค) ถูกเติมไปยังบัฟเฟอร์การขัดขวางเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องหลังจากการล้าง แอนติบอดีทุติยภูมิ (สารต้าน IgG-HRP ของหนูเมาส์, เพียร์ซ) ถูกเติมไปยังบัฟเฟอร์การขัดขวางเป็นเวลา 1 ชั่วโมงชั้นเดียวถูกล้าง พัฒนาโดยใช้ Sigmafast OPD และอ่านบนเครื่องอ่านเพลท Clariostar Omegaเวลส์ที่ไม่มีไวรัส ไม่มีไวรัสแต่ไม่มีแอนติบอดี และซีรั่มที่ทำให้เป็นมาตรฐานซึ่งแสดงฤทธิ์ระดับกลางถูกรวมไว้ในการทดลองแต่ละครั้งเป็นตัวควบคุม
การวิเคราะห์ทางสถิติดำเนินการใน GraphPad Prism (เวอร์ชัน 9.4.1)ความปกติของชุดข้อมูลได้รับการทดสอบโดยใช้การทดสอบชาพิโร-วิลค์เกณฑ์ที่ไม่ใช่พารามิเตอร์ถูกใช้สำหรับการเปรียบเทียบทั้งหมดการทดสอบแมนน์-วิทนีย์ใช้สำหรับตัวอย่างที่ไม่มีการจับคู่การทดสอบทั้งหมดเป็นแบบสองด้านโดยมีเกณฑ์นัยสำคัญเล็กน้อยที่ P ≤ 0.05
การวิเคราะห์เชิงสำรวจเบื้องต้นของชุดข้อมูลเสร็จสิ้นใน R (เวอร์ชัน 4.0.3)ซึ่งรวมถึงการพัฒนาเมทริกซ์ความสัมพันธ์อันดับตัวแปรเดียวของสเปียร์แมน โดยที่ความสัมพันธ์ระหว่างตัวแปรสองตัวแสดงด้วยขนาดและสีของสี่เหลี่ยมจัตุรัสนัยสำคัญทางสถิติระหว่างการเชื่อมโยงคำนวณโดยใช้ Spearman's rho โดยที่ค่า ≤0.05 ถือว่ามีนัยสำคัญการเปรียบเทียบที่ไม่มีนัยสำคัญทางสถิติถูกแยกออกจากเมทริกซ์และทำเครื่องหมายด้วยเซลล์ว่างค่า P ได้รับการปรับสำหรับการเปรียบเทียบหลายรายการโดยใช้การแก้ไขของ Holmแบบจำลองการถดถอยโลจิสติกแบบไบนารีถูกนำมาใช้เพื่อจำลองผลกระทบของตัวแปรในชุดข้อมูลต่อการตอบสนองเชิงบวกต่อโควิด-19การตอบสนองของทีเซลล์ IFN-γ และคะแนนไทเทอร์ของสารต้าน RBD/S1/S2/N IgG ถูกแปลงเป็นปัจจัย โดยที่แต่ละคนถูกกำหนดให้เป็นควอไทล์ที่เหมาะสมสำหรับแต่ละคะแนนหลังจากนั้น แบบจำลองการวิจัยเบื้องต้นได้รับการพัฒนาโดยใช้ฟังก์ชัน glm ในแพ็คเกจทางสถิติ (V4.0.3)อัตราส่วนอัตราต่อรองที่ได้จากโมเดลดั้งเดิมนี้แยกมาจากค่าสัมประสิทธิ์ของโมเดลโดยใช้ฟังก์ชัน 'odds_plot' ในแพ็คเกจ OddsPlotty (V1.0.2)เมื่อพัฒนาแบบจำลองการตรวจสอบความถูกต้องข้าม เราใช้ฟังก์ชัน "bestglm" จากแพ็คเกจ bestglm (V0.37.3) เพื่อจำกัดอคติของผู้ใช้ และตรวจสอบให้แน่ใจว่าสามารถเลือกชุดย่อยของตัวทำนายที่ดีที่สุดได้วิธีการที่เลือกนั้น "ครบถ้วนสมบูรณ์" และเกณฑ์ข้อมูลที่ใช้ในการประเมินความเหมาะสมของแบบจำลองคือ AICขั้นตอนการทำงานเดียวกันกับที่อธิบายไว้ข้างต้นถูกนำมาใช้เพื่อให้ได้อัตราส่วนอัตราต่อรอง
หากต้องการข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับการออกแบบการศึกษา โปรดดูบทคัดย่อการศึกษาธรรมชาติที่เชื่อมโยงกับบทความนี้
จดหมายและการร้องขอเอกสารควรส่งถึง Dr. Martin Scarr หรือ Professor Andrew Godkin โดยตรงบทความนี้ให้ข้อมูลต้นฉบับ
รหัส R ที่ใช้สร้างแบบจำลองทางสถิติสามารถเผยแพร่ต่อสาธารณะได้โดยไม่ต้องร้องขอ29ข้อมูลการพิมพ์ซ้ำและใบอนุญาตสามารถดูได้ที่ www.nature.com/reprints
มันโร, APS และคณะความปลอดภัยและภูมิคุ้มกันของวัคซีนป้องกันโควิด-19 จำนวน 7 เข็มเป็นโดสที่สาม (บูสเตอร์) หลังจากฉีด ChAdOx1 nCov-19 หรือ BNT162b2 (COV-BOOST) สองโดสในสหราชอาณาจักร: การทดลองระยะที่ 2 ปกปิด หลากหลายศูนย์ สุ่ม มีกลุ่มควบคุมมีดหมอ 398, 2258–2276 (2021)
สจ๊วต, ASV และคณะการสร้างภูมิคุ้มกัน ความปลอดภัย และการเกิดปฏิกิริยาของการฉีดวัคซีนปฐมภูมิแบบเฮเทอโรโลกัสกับโรคโควิด-19 (Com-COV2) โดยใช้ mRNA พาหะของไวรัส และวัคซีนเสริมโปรตีนในสหราชอาณาจักร: ระยะที่ 2 การทดลองแบบปกปิดครั้งเดียว การทดลองแบบสุ่ม และการทดสอบแบบไม่ด้อยกว่ามีดหมอ 399, 36–49 (2022)
ลี, ARIB และคณะประสิทธิภาพของวัคซีนป้องกันโควิด-19 ในผู้ป่วยภูมิคุ้มกันบกพร่อง: การทบทวนอย่างเป็นระบบและการวิเคราะห์เมตาดาต้าบีเอ็มเจ 376, e068632 (2022)
วชิรเดชนิรัตติศัย และคณะ.การวางตัวเป็นกลางของตัวแปร SARS-CoV-2 ไมครอน B.1.1.529 ลดลงโดยซีรัมหลังการฉีดวัคซีนมีดหมอ 399, 234–236 (2022)
Lipsich M, Krammer F, Regev-Yohai G, Lustig Y และ Baliser RD การติดเชื้อแบบก้าวหน้าในผู้ที่ได้รับวัคซีน SARS-CoV-2: การวัด สาเหตุ และผลที่ตามมานักบวชแห่งชาติด้านวิทยาภูมิคุ้มกันhttps://doi.org/10.1038/s41577-021-00662-4 (2021).
เลวิน EG และคณะการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันของร่างกายที่อ่อนแอต่อวัคซีน BNT162b2 Covid-19 เป็นเวลา 6 เดือนเอ็นอังกฤษเจ. แพทยศาสตร์.385, e84 (2021)
การ์เรโน, JM และคณะกิจกรรมของการพักฟื้นและซีรั่มวัคซีนต้าน SARS-CoV-2 Omicronธรรมชาติ 602, 682–688 (2022)
Chemaitelly, H. และคณะระยะเวลาการป้องกันวัคซีน mRNA ของกาตาร์ต่อเชื้อ SARS-CoV-2 Omicron BA.1 และ BA.2 สายพันธุ์ย่อยmedrxiv https://doi.org/10.1101/2022.03.13.22272308 (2022)
ไท MZ และคณะความถี่ของเซลล์หน่วยความจำ B ลดลงตามการติดเชื้อที่ลุกลามของวัคซีนเดลต้า COVID-19อณูเวชศาสตร์ EMBO.14, e15227 (2022)
Kundu, R. และคณะทีเซลล์หน่วยความจำแบบ Cross-reactive เกี่ยวข้องกับการปกป้องผู้ติดต่อที่ติดเชื้อ COVID-19 จากการติดเชื้อ SARS-CoV-2ชุมชนแห่งชาติ13, 80 (2022)
Geurtsvan Kessel, CH และคณะการตอบสนองของทีเซลล์และบีเซลล์ที่ทำปฏิกิริยากับโอไมครอน SARS CoV-2 ที่โดดเด่นในผู้รับวัคซีนโควิด-19วิทยาศาสตร์.ภูมิคุ้มกันวิทยาhttps://doi.org/10.1126/sciimmunol.abo2202 (2022)
เกา ยู และคณะทีเซลล์จำเพาะ SARS-CoV-2 ที่สืบทอดมาจะจดจำข้ามสายพันธุ์ของ Omicron ได้ยาแห่งชาติ.28, 472–476 (2022)
สคาร์, เอ็มเจ และคณะการวัดค่าทีเซลล์จำเพาะ SARS-CoV-2 จากเลือดครบส่วนเผยให้เห็นการติดเชื้อที่ไม่มีอาการและภูมิคุ้มกันของวัคซีนในบุคคลที่มีสุขภาพดีและผู้ป่วยมะเร็งอวัยวะแข็ง วิทยาภูมิคุ้มกัน https://doi.org/10.1111/imm.13433 (2021)
ตาล AT และคณะการตรวจวัดอย่างรวดเร็วของ T-cells Spike ของ SARS-CoV-2 ในเลือดครบของผู้ที่ได้รับการฉีดวัคซีนและผู้ติดเชื้อตามธรรมชาติเจคลินิก.ลงทุน.https://doi.org/10.1172/JCI152379 (2021)
ทาลลันไทร์ สหภาพยุโรป และคณะการตอบสนองของวัคซีนป้องกันโควิด-19 ในผู้ป่วยโรคปลอกประสาทเสื่อมแข็งติดตั้ง.เซลล์ประสาท91, 89–100 (2022)
แบรดลีย์ RE และคณะการติดเชื้อ COVID-19 อย่างต่อเนื่องด้วยกลุ่มอาการ Wiskott-Aldrich หายไปหลังการฉีดวัคซีนเพื่อการรักษา: รายงานผู้ป่วยเจคลินิก.ภูมิคุ้มกันวิทยา42, 32–35 (2022)